EpiQuik Histone H3 Modification Multiplex Assay Kit

背景介紹

EpiQuik Histone H3 Modification Multiplex Assay Kit (Colorimetric) 為一完整的最佳化檢測試劑套組，ELISA-like 的 96 盤式設計能夠一次偵測並且定量 21 種不同的Histone H3 組蛋白修飾，實驗步驟簡單且高效率。

組蛋白的修飾作用被定義為一種表觀遺傳修飾，有許多不同的酵素會造成組蛋白的後轉譯修飾 (Post-translational modifications, PTMs)，HATs (histone acetyltransferase) 會針對 lysine 位置進行乙烯基化 (acetylation) 作用，HDACs (histone deacetylase) 則會進行去乙烯基化 (deacetylation)反應，lysine和arginine 位置的甲基化 (methylation) 由 HMTs (histone methytransferases) 酵素造成，lysine的去甲基化 (demethylation) 由 HDMTs (histone demethylases) 負責，特定 serine 區域的磷酸化 (phosphorylation) 由 HKs (histone kinases) 造成。其他還有一些不同的修飾作用，例如在胺基酸接上 ubiquitin (Ub)、small ubiquitin-like 的 SUMOs 或者 poly ADP-ribose (PAR) units 等，表觀遺傳的研究中，histone acetylation、histone methylation以及DNA methylation 是研究最透徹的 marks。

一般來說，H3-K4、H3-K36 或者 H3-K79 的三甲基化修飾 (tri-methylation) 會造成染色質開啟，也就是形成常見的 euchromatin 部分，euchromatin 部分也常會發現高度的 histone acetylation 修飾，lysine 位置可被修飾為 mono-、di- 或者 tri-methylated，不同的修飾會造成不同的 chromatin 結構與轉錄改變，各種修飾的變化與搭配，能產生多樣性的調控與結果，這也構成了“histone code”組蛋白的密碼，透過了解組蛋白的密碼，或許就能看懂並解釋各種不同細胞及其表現的原因。

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實驗方式

各種不同的 histone H3 修飾辨識抗體接預先接於 well 底部，可以針對加入的樣品進行各種修飾的抓取，而後再經由偵測抗體及試劑呈色，由 450 nm 波長的吸收光源強度來判斷外加樣品的修飾與否與程度定量。

樣品可為組蛋白萃取或者純化好的 histone H3 蛋白，組蛋白萃取的反應量為每個 well 20 ng ~ 500 ng，建議最適量為 50 ng ~ 100 ng 之間，取決於樣品的純度，已純化的 histone H3 蛋白反應量為每個 well 1 ng ~ 25 ng，建議最適量則是 4 ng ~ 5 ng。

EpiQuik™ Histone H3 Modification Multiplex Assay Kit (Colorimetric) 實驗流程圖示

EpiQuik™ Histone H3 Modification Multiplex Assay Kit (Colorimetric) 實驗原理示意圖

MCF-7 和 MDA-231 細胞使用 EpiQuik™ Total Histone Extraction Kit (Cat. No. OP-0006) 萃取 histone，接著使用 EpiQuik™ Histone H3 Modification Multiplex Assay Kit (Colorimetric) 來檢測各種組蛋白 H3 的修飾，使用的 total histone protein 量為 100 ng。

產品列表

貨號	產品	數量
P-3100-96	EpiQuik Histone H3 Modification Multiplex Assay Kit (Colorimetric) 組蛋白H3修飾多重檢測試劑套組(比色法)(組) 廠牌: Epigentek	96 assays

EpiQuik Histone H3 Modification Multiplex Assay

• 同時偵測 21 種 H3 Histone 修飾，其中包含最重要的修飾種類以及已知確認的修飾種類
• 快速有效的實驗方式，只需 2 小時 30 分即可完成檢測
• 創新的呈色方式，不須放射標定、電泳分離、層析或者昂貴的分析設備
• 高靈敏度，每個 well 只需要 0.5 ng 的修飾目標即可偵測到，histone exteacts 的偵測範圍為每個well 20 ng ~ 500 ng
• 附有 assay control 能讓您方便的定量各種修飾結果
• 附有Total histone H3 sets，可讓進行樣品間的 normalizing
• 簡單、高效能且實驗再現性高。

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P-3100-96 EpiQuik™ Histone H3 Modification Multiplex Assay Kit 使用手冊