Absolutely RNA miRNA Kit 提供從細胞或組織樣本快速純化出高品質miRNA的方法。Absolutely RNA miRNA Kit 方法是在存有酒精和離液鹽 (chaotropic salt) 的情形下進行,使用能結合細胞 RNA甚至是非常小尺寸 RNA 之基質的 spin cup。此方法能有效地回收 miRNA 和 mRNA,進而由 QRT-PCR 或晶片分析等方式來研究 miRNA 和 mRNA 的基因表現。
RNA 的純度在基因表現研究中相當重要,若有 DNA 汙染可能導致高估總 RNA的含量,進而影響樣品之間比較的正確性。此外,DNA 也會影響目標 RNA 的擴增或雜交實驗的訊號。Absolutely RNA miRNA Kit 含有 pre-filter 離心步驟以去除組織及培養細胞裂解樣品中的 genomic DNA,以及額外的 DNase 處理步驟來完整除去組織樣品中殘留的 genomic DNA,確保實驗獲得高產量的 miRNA 產物 (miRNA-containing total RNA)。
簡單又有效率的 RNA 純化方法總結在圖中。首先,細胞或組織在均質化過程中加入 guanidine thiocyanate 來使蛋白變性、裂解細胞並同時防止 RNA 裂解酶 (RNases, byribonuclease) 造成 RNA 降解。細胞裂解後,用苯酚 (phenol) 萃取組織樣品以去除蛋白質,但對從細胞製備的裂解物則不需透過苯酚萃取。樣品預過濾去除 genomic DNA 後,將濾液與酒精混合再轉移至 RNA-binding spin cup;接續 DNase 切除步驟進而去除任何殘留的DNA;之後一系列洗滌步驟清除污染物 (包括DNase);最後,以小體積的低離子強度緩衝液沖洗出高純度的RNA,在微量離心管中獲得你想要的 RNA。獲取的 total RNA 是即時定量 RT-PCR (real time quantitative RT-PCR) 和生物晶片 (microarray) 分析的理想選擇,可用來研究 miRNA 或 mRNA 的表現情形。
貨號 | 產品 | 數量 | |
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400814 | Absolutely RNA miRNA Kit RNA miRNA萃取試劑組 (組) 廠牌:Agilent | 50 preps |