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EpiQuik Circulating Cell-Free DNA Isolation Kit

循環游離核酸純化試劑


在基因與表觀基因分析的領域中, plasma/ serum 或者其他體液中的 circulating cell-free DNA (ccfDNA) 能作為早期偵測臨床異常疾病的契機,廣泛的應用如癌症、自體免疫疾病、感染症及胎兒異常。ccfDNA 在臨床研究大多比例是從 mononucleosomes 而來的 170 bases 長度,以及少部分從 di-nucleosomes 而來的 360 bases 長度片段。一般細胞凋亡及各種病理狀態之下 (例如 inflammation, pulmonary embolism, autoimmune disease, 和 cancer),nucleosomal complexes 容易被釋放進入血液循環之中。也有研究指出,使用從 nucleosomal complexes 來的 ccfDNA 來作為基因及表關遺傳檢測分析,可以提供更為準確的生理及病理狀態數據。目前有許多從 plasma 及 serum 萃取 ccfDNA 的方法,大多的方法都是採用 silicone column binding 或者是 phenol-chloroform 分離的方式來擷取 DNA,但透過此種方法分離出的 DNA 包含了 ccfDNA 及 non-ccfDNA,可能會影響下游實驗分析的準確性。為了解決此種問題, Epigentek 開發出 EpiQuikTM Circulating Cell-Free DNA Isolation Kit 來純化 ccfDNA。

EpiQuik™ Circulating Cell-Free DNA Isolation Kit 使用磁珠式的大小分離技術來從 plasma/ serum 樣品中的 mono-nucleosomal 和 di-nucleosomal complexs,分離出 circulating cell-free DNA (ccfDNA),此 ccfDNA 可直接用於後續 real-time PCR 實驗或者次世代定序的 DNA library 製備。

方法與實驗流程

EpiQuik™ Circulating Cell-Free DNA Isolation Kit 包含所有所需試劑並且已經進行最適化調整, 可以從 plasma/serum 中簡單快速地純化出小片段的 nucleosomal DNA,試劑中的 ccfDNA Capture Beads透過磁力分離大小片段,有效抓取 mono- / di-nucleosomal complexes (可配合 EpiMag™ HT (96-Well) Magnetic Separator 或其他類似產品使用),抓取到的 nucleosomal DNA 而後經過酵素作用釋放出來,再透過 MQ Binding Beads 來做進一步純化。最後得到的純化 ccfDNA 可直接進行後續實驗或者保存。

EpiQuik™ Circulating Cell-Free DNA Isolation Kit 實驗流程

起始樣品

各種來源的新鮮或冷凍 plasma/ serum 皆適用,不過新鮮的 plasma/ serum 通常會比冷凍樣品獲得更高產量的 DNA,再者,冷凍的 plasma/ serum 每年約會損失 10 % 左右的 DNA。使用的 plasma/ serum 樣品量為 0.1- 1 ml ,標準使用量約每個樣品 0.5 ml。如果以 serum 作為樣品時,因考量到白血球的半衰期及防止白血球的破裂,serum 儘量於從血液中分離的六小時之內進行實驗。

使用 HeLa mononucleosomes 加入至 0.5 ml 的 plasma 中來測試回收率,可以看到 EpiQuik™ Circulating Cell-Free DNA Isolation Kit 擁有良好的回收率。
不同量的 HeLa mononucleosome 加入至 0.5 ml 的 plasma 中來進行純化, 分離出的 DNA 片段大小約為 170 bp。

產品列表

貨號 產品 數量
P-1064-25 EpiQuik Circulating Cell-Free DNA Isolation Kit 25 samples
P-1064-50 EpiQuik Circulating Cell-Free DNA Isolation Kit 50 samples

EpiQuik Circulating Cell-Free DNA Isolation Kit

  • 創新的磁珠設計技術,可從 plasma/ serum 之中分離出主要約 170 bps 大小的 circulating cell-free DNA,分離出的 DNA 可直接進行下游實驗,例如 qPCR 或 NGS DNA 建庫。
  • 快速流暢的實驗步驟,只需 2 小時即可完成實驗,不需 gels、columns或者離心等步驟。
  • 可以有效的去除 proteins、salts、nucleases、PCR inhibiting substances 以及其他雜質,如 polysaccharides、polyphenols 和 lipids 等。
  • 此產品抓取 DNA 的高敏感性與高效能特性,可達到 > 80% 的 DNA 回收率 (從 mononucleosomal DNA),即使在少量的 0.1 ml 樣品情況下,依然有良好效能。
  • 無論是人工操作或是自動化實驗皆適合, single tube 和 96-well 盤式皆通用。

說明書下載

P-1064 EpiQuik Circulating Cell-Free DNA Isolation Kit使用手冊
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