EpiQuik Histone H4 Modification Multiplex Assay Kit

背景介紹

EpiQuik Histone H4 Modification Multiplex Assay Kit (Colorimetric) 為一完整的最佳化檢測試劑套組，ELISA-like 的 96 盤式設計能夠一次偵測並且定量 10 種不同的Histone H4 組蛋白修飾，實驗步驟簡單且高效率。

組蛋白修飾是一常見的表觀基因修飾種類，這些蛋白上的後轉譯修飾包含由 HATs (histone acetyltransferase) 及 HDACs (histone deacetylase) 針對特定 lysine 位置進行的乙烯基化修飾 (acetylation)，由 HMTs (histone methytransferases) 及 HDMTs (histone demethylases) 針對特定lysine 和 arginine 位置的甲基化修飾 (methylation)，以及透過 HKs (histone kinases) 修飾特定 serine 位置磷酸化 (phosphorylation) 或者在蛋白接上 ubiquitin (Ub)、small ubiquitin-like modifiers (SUMOs)、poly ADP-ribose (PAR) units 等的不同修飾種類。

除了 DNA 甲基修飾外，組蛋白的乙烯基修飾及甲基修飾是最常見的表觀基因標誌，現有很多種已深入研究的 H4 組蛋白修飾類型，如 Ser-1 的 phosphorylation、Arg-3 的 methylation、lysine 5, 8, 12, 16 的 acetylation 以及 lysine 20 的 mono-, di-, tri-methylation。

一般來說，euchromatin 常會發現高度的 histone H4 acetylation 修飾，如果透過 histone acetyltransferases 進行 deacetylation 以後，基因即會呈現轉錄抑制的狀態，condensed heterochromatin 富含 H4K20 甲基化，lysine 的位置會有 mono-、di- 或者 tri-methylated 等不同的修飾程度，而這些修飾程度的不同也會有不同的 chromatin 結構與轉錄的改變。進一步加上磷酸化修飾的搭配變化，構成了許多不同的排列組合，這也構成了“histone code”組蛋白的密碼，透過了解組蛋白的密碼，或許就能看懂並解釋各種不同細胞及其表現的原因。

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實驗方式

各種不同的 histone H4 修飾辨識抗體接預先接於 well 底部，可以針對加入的樣品進行各種修飾的抓取，而後再經由偵測抗體及試劑呈色，由 450 nm 波長的吸收光源強度來判斷外加樣品的修飾與否與程度定量。樣品可為組蛋白萃取或者純化好的 histone H4 蛋白，組蛋白萃取的反應量為每個 well 20 ng ~ 500 ng，建議最適量為 50 ng ~ 100 ng 之間，取決於樣品的純度，已純化的 histone H4 蛋白反應量為每個 well 1 ng ~ 25 ng，建議最適量則是 4 ng ~ 5 ng。

EpiQuik™ Histone H4 Modification Multiplex Assay Kit (Colorimetric) 實驗流程圖示

EpiQuik™ Histone H4 Modification Multiplex Assay Kit (Colorimetric) 實驗原理示意圖

MCF-7 和 MDA-231 細胞使用 EpiQuik™ Total Histone Extraction Kit (Cat. No. OP-0006) 萃取 histone，接著使用 EpiQuik™ Histone H4 Modification Multiplex Assay Kit (Colorimetric) 來檢測各種組蛋白 H4 的修飾，使用的 total histone protein 量為 100 ng。

產品列表

貨號	產品	數量
P-3102-96	EpiQuik Histone H4 Modification Multiplex Assay Kit (Colorimetric) 組蛋白H4修飾多重檢測試劑套組(比色法)(組) 廠牌: Epigentek	96 assays

EpiQuik Histone H4 Modification Multiplex Assay

• 同時掃描並測量 10 種不同的 H4 組蛋白修飾作用，將近所有種類的 H4 修飾位點
• 快速高效率的實驗流程，只需要 2 小時 30 分即可完成全部實驗
• 創新的呈色方式，不須放射標定、電泳分離、層析或者昂貴的分析設備
• 高靈敏度，每個 well 只需要 0.5 ng 的修飾目標即可偵測到，histone exteacts 的偵測範圍為每個well 20 ng ~ 500 ng
• 附有 assay control 能讓您方便的定量各種修飾結果
• 附有Total histone H4 sets，可讓進行樣品間的 normalizing
• 簡單、高效能且實驗再現性高。

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P-3100-96 EpiQuik™ Histone H3 Modification Multiplex Assay Kit 使用手冊